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MABTECH ELISpot & FluoroSpot
Nuovi prodotti; principio del metodo.
 
 ELISpot

L’ELISpot è un test immunologico molto sensibile, che permette la rilevazione di citochine secrete a livello di singola cellula. Con rilevazione  che può essere più bassa di una cellula su 100 000. A seconda della sostanza analizzata, il saggio ELISPOT è tra le 20 e le 200 volte più sensibile di un convenzionale ELISA.

L'ELISpot mostra una sensibilità simile ad una analisi RT-PCR, ma rileva la proteina secreta al posto del mRNA. Per le analisi delle citochine questo è vantaggioso, in quanto molte citochine sono regolamentate traslazionalmente.

La metodica è particolarmente utile quando si studiano piccole popolazioni di cellule attive, come quelle che si riscontrano in specifiche risposte immunitarie.

 

Applicazioni (IFNg, IL-4, Granzyme...)

Allergia da contatto e Atopica

Cellule B

Controlli positivi in ELISpot

Tutti i prodotti in ELISpot ed ELISA
Gli  anticorpi monoclonali specifici per le citochine sono immobilizzati su una fase solida. Si consiglia l'uso di una piastra a 96 pozzetti in fluoruro polivinile-(PVDF).  Successivamente le cellule da esaminare sono aggiunte ai pozzetti sia in presenza, che in assenza di stimoli e incubate per il tempo necessario a consentire la produzione di citochine.

 Le citochine secrete si legano agli anticorpi di cattura in prossimità delle cellule secernenti e, dopo la rimozione delle cellule con il lavaggio, vengono aggiunti anticorpi anti-citochine per la rilevazione.  Questi anticorpi sono direttamente coniugati con l'enzima o biotinilati, nel qual caso è richiesta una terza fase con l'enzima coniugato streptavidina.  Infine si aggiunge un substrato cromogeno catalizzato dall'enzima.  In questo modo si produce uno spot visibile, corrispondente alla posizione della cellula di produzione.
Le macchie possono essere contate al microscopio per dissezione o con un lettore automatico ELISpot ed è possibile registrare la frequenza di cellule positive.
 

Formati disponibili

                                                                                          
I nostri kit  ELISpot sono disponibili in diverse composizioni.  
Gli stessi anticorpi monoclonali possono essere ottenuti sia come reagenti separati, che come coppie di anticorpi abbinati.

Pro Kit ELISpot: è il kit pronto all’uso, con piastre già coattate, per ottimizzare i tempi, garantendo il massimo della riproducibilità.  
kit ELISpot: la base con anticorpo di cattura, anticorpo di rivelazione e enzima coniugato alla streptavidin.

kit ELISpot PLUS : un ELISpot kit completo che comprende piastra e substrato.  Nella tabella qui di seguito è esposta la lista dei contenuti specifici di ciascun kit.

Il kit PLUS è anche disponibile nella versione in strip (12 strip da 8 pozzetti per ogni striscia). Questo permette all'utente di eseguire una piastra in momenti diversi ed è ideale quando ad esempio si hanno solo pochi campioni da testare.

 

 tabella.jpg

     
     
 FluoroSpot
     
 Il metodo più luminoso per rilevare cellule che rilasciano citochine multiple
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Il FluoroSpot si basa sullo stesso principio dell'ELISpot ma utilizza un sistema di rivelazione a fluorescenza consentendo la detection di cellule che rilasciano una o due differenti citochine nello stesso pozzetto. E' particolarmente adatto all'analisi di cellule T polifunzionali oppure di macrofagi, monociti e cellule dendritiche.

L'analisi della secrezione di citochine da cellule immuno innate può essere utile per delineare sottopopolazioni distinte sulla base del loro profilo di citochina

fluorospotassay.jpg
     
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